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-./鏈的延伸終止在 %%.23處。 !!水浴氮吹儀雙脫氧合成末端終止法 -./序列分析操作中要用四個反應管，每一管都加入 -./模板， -./聚合 酶，四種 %.23，其中一種 %.23是用同位素標記的。除此之外，每一管還要加入一種 %%.23，即 /管加入 %%/23，2管加入 %%223，4管加入 %%423，5管加入 %%523。以 /管為例，當模板上堿基是 2時，反應體系 中有兩種堿基可與之配對： %/23和 %%/23。如果是 %/23與之配對，引物的延伸還能繼續下去。如果是 %%/23與之配對，引物的延伸就會到此終止。 /管中會出現 長短不一，但總是終止在 /位的核苷酸鏈。另外三管中出現 的情形也如此，即四個反應管分別存在以四種不同核苷酸為 01末端的長度不等的核苷酸鏈。這四個反應管中核苷酸鏈的 總的結果是一系列長度只差一個核苷酸的 -./聚合鏈。聚 合反應結束后，把 ;管內的產物分別加到超薄的聚丙烯酰 胺—尿素變性凝膠板上電泳，這種電泳分辨能力可達到相差 一個核苷酸的水平，四條泳道形成不同的電泳條帶。經過放 射自顯影，從下向上讀即是新合成鏈 71!01的堿基排列順序 （圖 89 <）。>*? 4&@A$#B法，該法是先用同位素 對 -./片段的末端進行標記，然后用專一的化學試劑對特 定的堿基進行化學修飾，經過修飾的堿基從糖環上脫落，同 時和該糖環相連的磷酸二酯鍵斷
裂，產生在該修飾堿基處斷 開的長短不一的 -./片段。硫酸二甲酯專一修飾鳥嘌呤，甲酸修飾嘌呤堿基，肼修飾嘧啶堿基，在有 .*5@存在的條件下，肼只修飾胞嘧啶。分別用上述化學試劑降解 -./，然后電泳。電泳條帶從下向上讀 即是待測 -./ 71!01的核苷酸序列（圖 89 8:）。 第五節 !轉基因動物、克隆動物和基因剔除技術 一、轉基因動物 !!轉基因動物（B#*+C,$+&’ *+&?*@C）是利用基因工程和胚胎工程技術，改變動物遺傳性狀的新方法，是將 外源基因導入動物的受精卵，再將受精卵植入到代孕動物的輸卵管或子宮中培育的動物（圖 89 88）。轉 基因動物中的外源基因已與動物本身的基因組整合，外源基因隨細胞分裂而增殖，在體內得到表達，并傳 圖 89 8:!化學修飾裂解法測序原理 第十七章 #基因技術#"! 給下一代。也有人先將外源基因導入精子或卵細胞，再讓導入外源基因的精子或卵細胞受精，培育轉基因 動物。 ##轉基因動物能夠創造醫學研究需要的動物模型、改 良動物品質、培育動物新品種。例如，將大鼠的生長激 素基因導入小鼠受精卵培育的轉基因小鼠體重是普通 小鼠的二倍，成為超級鼠。 ##人體內有許多種活性肽和生長因子，它們在體內的 生理功能十分重要，但含量極少，提取和純化都很困難。 可利用轉基因技術將人類的這些基因轉入動物的受精 卵，培育轉基因動物，從轉基因動物的某些產物中提取 這些基因的產物。如將人類的基因轉入奶牛，從牛奶里 提取人類基因的產物。或將人類基因轉入雞，從雞蛋內 提取基因產物。這些轉
基因動物就像工廠一樣可以源 源不斷的提供人類需要的產品，因此稱其為動物工廠或 生物工廠。 ##外源基因能夠轉入動物，建立轉基因動物，也可以 轉入植物，建立轉基因植物。以這些轉基因生物為直接 食品或作為原料加工生產的食品為轉基因食品。轉基 因食品的出現有望幫助解決人們吃飯的難題。但對轉 基因食品的安全性還沒有取得共識，對目前應不應該把 轉基因食品投放市場還存在著爭論。 二、克隆動物 ##克隆是英語 $%&’(的音譯，即無性繁殖�？寺游� 是生物體通過體細胞進行的無性繁殖以及由無性繁殖 形成的基因型完全相同的后代個體組成的種群。克隆 動物是多種生物技術結合的產物，是把細胞核轉移到去 核的卵細胞中，培育新型生物品種的細胞工程技術�？� 隆動物技術主要包括三個步驟。 # #!*制備成熟的卵細胞。 # #)*細胞核移植，將供體細胞的細胞核與去核的 卵細胞融合成一個雜合細胞。 # #+*將“核質融合”的卵細胞移植到借腹懷孕動 物的子宮發育直到出生（圖 !" !)）。 ##克隆動物的遺傳信息完全來自于提供細胞核的 動物，即克隆動物是供核動物的復制品。由此可見， 克隆動物與轉基因動物不同。轉基因動物是將外源 基因轉入動物的受精卵內，產生后代個體的方式仍 然是有性繁殖，只不過后代細胞染色體內插入了外 源基因�？寺游锸菍⒐w細胞核移入到去除了細 !*提取卵細胞； )*提取體細胞； +*卵細胞去核； ,*體細胞核轉胞核的未受精卵細胞內，是細胞無性繁殖的產物。 入去核卵細胞； -*篩選；
